Бактериофаги доказательная медицина

Немного истории…

Бактериофаги были обнаружены 100 лет назад. Ученые начали их изучать, и заметили, что иногда фаготерапия дает отличные результаты, а иногда оказывается малоэффективной. Как выяснили позже, первые бактериофаги делали с грубыми нарушениями технологии производства и хранения.

С появлением антибиотиков бактериофаги отошли на второй план, но, тем не менее, они тоже использовались в годы Великой Отечественной войны для лечения ран и предотвращения эпидемий кишечных инфекций.

https://www.youtube.com/watch?v=ytaboutru

Откровенно говоря, нам в институте о них рассказывали очень мало и как-то невнятно. Во времена моей врачебной практики на различных конференциях и семинарах о бактериофагах, если и упоминалось, то вскользь. Поэтому мы их не назначали.

Сейчас интерес к ним проснулся. Это связано с тем, что резистентность к антибиотикам приобрела угрожающие масштабы. Даже на стадии разработки очередного антибиотика к нему уже появляются устойчивые штаммы. И часто бывает, что миллионы, потраченные на создание и разработку нового препарата, оказываются выброшенными на ветер. Такие средства даже не выходят на рынок.

Если к первым антибиотикам устойчивость развивалась за 20-30 лет, то сейчас – за 2-3 года.

С каждым новым поколением антибиотиков сокращается период, за который микробы вырабатывают против него защиту.

Борцы с патогенами

Первые попытки использовать бактериофаги для лечения инфекционных заболеваний были предприняты практически сразу после их открытия, однако недостаток знаний и несовершенные биотехнологии того времени не позволили достичь полного успеха. Тем не менее дальнейшая клиническая практика показала принципиальную возможность успешного применения бактериофагов при инфекционных заболеваниях желудочно-кишечного тракта, мочеполовой системы, при острых гнойно-септических состояниях больных, для лечения хирургических инфекций и т. д.

По сравнению с антибиотиками бактериофаги имеют ряд преимуществ: они не вызывают побочных эффектов, к тому же строго специфичны для определенных видов бактерий, поэтому при их использовании не нарушается нормальный микробиом человека. Однако такая высокая избирательность создает и проблемы: чтобы успешно лечить пациента, нужно точно знать инфекционный агент и подбирать бактериофаг индивидуально.

Фаги можно использовать и профилактически. Так, Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г. Н. Габричевского разработал профилактический продукт «ФУДФАГ» на основе коктейля из бактериофагов, снижающий риск заражения острыми кишечными инфекциями. Клинические исследования показали, что недельный прием препарата позволяет избавиться от гемолизирующей кишечной палочки и других патогенных и условно-патогенных бактерий, вызывающих дисбактериоз кишечника.

Бактериофагами лечат инфекционные болезни не только людей, но и домашних и сельскохозяйственных животных: мастит у коров, колибактериоз и эшерихиоз у телят и свиней, сальмонеллез у кур… Особенно удобно применять фаговые препараты в случае аквакультуры – для лечения промышленно выращиваемых рыб и креветок, так как в воде они долго сохраняются.

например, в США и России ежегодно регистрируется до 40 тыс. заболевших сальмонеллезом, из которых 1 % умирает. Распространение этой инфекции в значительной степени связано с выращиванием, переработкой и потреблением различных видов птицы, и попытки применить для борьбы с ней бактериофаги дали многообещающие результаты.

Бактериофаги

Так, американская компания Intralytix производит фаговые препараты для борьбы с листериозом, cальмонеллезом и бактериальным загрязнением кишечной палочкой. Они разрешены к применению как добавки, предотвращающие размножение бактерий на продуктах питания – их распыляют на продукты из мяса и домашней птицы, а также на овощи и фрукты.

Очевидным применением бактериофагов является дезинфекция, т. е. уничтожение бактерий в тех местах, где их не должно быть: в больницах, на пищевых производствах и т. п. Для этой цели британская компания Fixed-Phage разработала метод фиксации фаговых препаратов на поверхностях, обеспечивающий сохранение биологической активности фагов до трех лет.

Кто в этом виноват?

  1. Врачи, которые необоснованно назначают антибиотик или ведут каналы на ютубе «для всех», где ради повышения своей популярности называют конкретные антибиотики при конкретных заболеваниях.
  2. Плачевное состояние нашей отечественной медицины с ее катастрофической нехваткой врачей и непродуманной организацией поликлинической помощи. Порой, легче попасть на прием к королеве Великобритании, чем к врачу. Поэтому люди вынуждены идти в интернет и назначать себе лечение самостоятельно, включая антибиотики.
  3. Интернет, где статьи в большинстве случаев написаны копирайтерами – людьми без медицинского образования, которые не понимают важности и серьезности того, о чем пишут.
  4. Сотрудники аптек, которые с легкостью рекомендуют антибиотики.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcreatorsru

И не говорите мне, что такого нет!

Захожу на днях в группу для сотрудников аптек, и там один мужчина спрашивает, чем лечить уреаплазму (хотя «лечить» нужно не микроб, а заболевание).

Друзья, это безумие!!!

При таком положении дел пройдет совсем немного времени, и у нас не останется антибиотиков, к которым чувствительны микробы. Смертность вырастет многократно!

Я призываю вас, нет, я УМОЛЯЮ вас: не рекомендуйте антибиотики!

А администраторов групп я призываю хоть иногда включать мозги и УДАЛЯТЬ подобную информацию. Она говорит о НЕПРОФЕССИОНАЛИЗМЕ фармацевтов и провизоров, поскольку они не знают принципов рациональной антибиотикотерапии.

Мы с вами работаем в самой хрупкой сфере человеческой жизни: в сфере здоровья. Давайте всегда помнить главную заповедь медицины «НЕ НАВРЕДИ!»

Семь дней творения

Современные методы синтетической биологии позволяют не только вносить различные модификации в фаговые геномы, но и создавать полностью искусственные активные фаги. Технологически это несложно, нужно только синтезировать фаговый геном и ввести его в бактериальную клетку, а там он уже сам запустит все процессы, необходимые для синтеза белков и сборки новых фаговых частиц. В современных лабораториях на эту работу уйдет всего несколько дней.

Генетические модификации применяют, чтобы изменить специфичность фагов и повысить эффективность их терапевтического действия. Для этого наиболее агрессивные фаги снабжают узнающими структурами, связывающими их с целевыми бактериями. Также в вирусные геномы дополнительно встраивают гены, кодирующие токсические для бактерий белки, нарушающие метаболизм, – такие фаги более смертоносны для бактерий.

Бактерии имеют несколько механизмов защиты от антибиотиков и бактериофагов, один из которых – разрушение вирусных геномов ферментами рестрикции, действующими на определенные нуклеотидные последовательности. Для увеличения терапевтической активности фагов можно за счет вырожденности генетического кода так «переформатировать» последовательности их генов, чтобы минимизировать число нуклеотидных последовательностей, «чувствительных» к ферментам, одновременно сохранив их кодирующие свойства.

https://www.youtube.com/watch?v=ytpolicyandsafetyru

Универсальный способ защиты бактерий от всех внешних воздействий – так называемые биофильмы, пленки из ДНК, полисахаридов и белков, которые бактерии создают совместными усилиями и куда не проникают ни антибиотики, ни терапевтические белки. Такие биопленки – головная боль врачей, так как они способствуют разрушению зубной эмали, образуются на поверхности имплантов, катетеров, искусственных суставов, а также в дыхательных путях, на поверхности кожи и т. п.

#

Методами синтетической биологии удалось разработать и бактерио­фаги, вооруженные самым изощренным оружием, которое бактерии используют против самих фагов. Речь идет о бактериальных системах CRISPR-Cas, представляющих собой комплекс фермента нуклеазы, расщепляющей ДНК, и РНК-последовательности, направляющей действие этого фермента на определенный фрагмент вирусного генома.

Разобравшись с механизмом работы систем CRISPR-Cas, исследователи попробовали снабдить подобным «оружием» и самих фагов, для чего в их геном ввели комплекс генов, кодирующий нуклеазу и адресующие последовательности РНК, комплементарные специфическим участкам генома бактерий. «Мишенью» могут выступать гены, ответственные за множественную лекарственную устойчивость. Эксперименты увенчались полным успехом – такие фаги с большой эффективностью поражали бактерии, на которые были «настроены».

Как устроен бактериофаг?

Выглядит бактериофаг, как инопланетянин: большая голова, худенькое тельце, которое специалисты называют «хвостом», и несколько ножек.

Самое главное место бактериофага – голова. Все как у нас. В ней покоится молекула ДНК (или РНК). Она не только хранит всю наследственную информацию о вирусе, но и содержит подробную «инструкцию», как ему расти и крепнуть.

Бактериофаги устроены настолько просто, что даже самостоятельно не умеют размножаться. Для этого им нужна бактериальная клетка.

Отличия бактериофагов и антибиотиков

1. Фаг «бьет» точно в цель, как снайпер. Действие антибиотика – это «бомбежка» по местности, где есть свои и чужие.

Поэтому антибиотики часто вызывают дисбиоз кишечника. Фаги – нет.

2. Антибиотики обязательно действуют и на другие органы.

Например, так любимый многими докторами Амоксиклав может привести к антибиотико-ассоциированному колиту, гепатиту, интерстициальному нефриту.

Литические бактериофаги направленно атакуют патогенные бактерии, обитающие в наших органах, включая слизистую кишечника, не трогая полезную микрофлору

Цефалоспорины «сажают» печень, почки, могут вызвать изъязвления слизистой рта.

Сумамед тоже не лучшим образом действует на печень, почки, может давать побочные в виде сердцебиения, головокружения, головной боли, сонливости.

1. Широкий спектр действия. Необязательно знать возбудителя.

2. Не нужны специальные условия хранения и транспортировки.

3. Можно подобрать антибиотик, чтобы курс лечения был недорогим.

«Так почему же врачи так редко назначают фаги и травят народ антибиотиками?»

В терапевтических целях фаги необязательно использовать напрямую. За миллионы лет эволюции бактериофаги разработали арсенал специфических белков – инструментов для распознавания целевых микроорганизмов и манипуляций с биополимерами жертвы, на основе которых можно создавать противобактериальные препараты.

Наиболее перспективными белками такого типа являются ферменты эндолизины, которые фаги используют для разрушения клеточной стенки при выходе из бактерии. Сами по себе эти вещества являются мощными антибактериальными средствами, нетоксичными для человека. Эффективность и направленность их действия можно повысить, изменив в них адресующие структуры – белки, специфически связывающиеся с определенными бактериями.

Большинство бактерий делятся по устройству клеточной стенки на грамположительные, мембрана которых покрыта очень толстым слоем пептидогликанов, и грамотрицательные, у которых слой пептидогликана расположен между двумя мембранами. Использование природных эндолизинов особенно эффективно в случае грамположительных бактерий (стафилококков, стрептококков и др.

), поскольку пептидогликановый слой у них расположен снаружи. Грамотрицательные бактерии (cинегнойная палочка, сальмонеллы, кишечная палочка и др.) являются менее доступной мишенью, поскольку ферменту, чтобы добраться до внутреннего пептидогликанового слоя, необходимо проникнуть сквозь внешнюю бактериальную мембрану.

Для преодоления этой проблемы были созданы так называемые артилизины – модифицированные варианты природных эндолизинов, содержащие поликатионные или амфипатические пептиды, которые дестабилизируют внешнюю мембрану и обеспечивают доставку эндолизина непосредственно к пептидогликановому слою. Артилизины обладают высокой бактерицидной активностью и уже показали свою эффективность при лечении отитов у собак (Briers et al., 2014).

Примером модифицированного эндолизина, избирательно действующего на определенные бактерии, является препарат P128 канадской компании GangaGen, Inc. Он представляет собой биологически активный фрагмент эндолизина, соединенный с лизостафином – адресующей белковой молекулой, которая связывается с поверхностью клеток стафилококков.

В наши дни бактериофаги широко применяются также в качестве простых систем для наработки белков с заданными свойствами. Речь идет о разработанной в 1980-х гг. крайне эффективной молекулярно-селекционной методике – фаговом дисплее. Этот термин был предложен американцем Дж. Смитом, который доказал, что на основе бактериофагов кишечной палочки можно создать жизнеспособный модифицированный вирус, несущий на своей поверхности чужеродный белок.

Для этого в фаговый геном внедряется соответствующий ген, который сливается с геном, кодирующим один из поверхностных вирусных белков. Такие модифицированные бактериофаги можно выделить из смеси с фагами дикого типа благодаря способности «чужого» белка связываться со специфичными антителами (Smith, 1985).

Из экспериментов Смита последовало два важных вывода: во-первых, используя технологию рекомбинантных ДНК, можно создавать огромные по разнообразию популяции численностью 106–1014 фаговых частиц, каждая из которых несет на своей поверхности разные варианты белков. Такие популяции назвали комбинаторные фаговые библиотеки.

С помощью фагового дисплея сегодня производят белки, которые могут избирательно связываться с терапевтическими мишенями, например, экспонированные на поверхности фага М13, способные узнавать и взаимодействовать с опухолевыми клетками. Роль этих белков в фаговой частице заключается в «упаковке» нуклеиновой кислоты, поэтому они хорошо подходят для создания препаратов генотерапии, только в этом случае они формируют частицу уже с терапевтической нуклеиновой кислотой.

На сегодня можно выделить два основных направления применения фагового дисплея. Технология на основе пептидов используется для исследования рецепторов и картирования сайтов связывания антител, создания иммуногенов и нановакцин, а также картирования сайтов связывания субстратов у белков-ферментов. Технология на основе белков и белковых доменов – для отбора антител с заданными свойствами, изучения белок-лигандных взаимодействий, скрининга экспрессируемых фрагментов комплементарной ДНК и направленных модификаций белков.

С помощью фагового дисплея можно вносить узнающие группировки во все виды поверхностных вирусных белков, а также в основной белок, формирующий тело бактериофага. Вводя в поверхностные белки пептиды с заданными свойствами, можно получить целый спектр ценных биотехнологических продуктов. Например, если этот пептид будет имитировать белок опасного вируса или бактерии, узнаваемый иммунной системой, то такой модифицированный бактериофаг представляет собой вакцину, которую можно просто, быстро и безопасно наработать.

Если же концевой поверхностный белок бактериофага «адресовать» на раковые клетки, а к другому поверхностному белку присоединить репортерные группы (например, флуоресцирующие или магнитные), то получится средство для обнаружения опухолей. А если к частице присоединить еще и цитотоксический препарат (а современная биоорганическая химия позволяет легко это сделать), то получится лекарство, направленно действующее на раковые клетки.

Одним из важных применений метода фагового дисплея белков является создание фаговых библиотек рекомбинантных антител, где антигенсвязывающие фрагменты иммуноглобулинов расположены на поверхности фаговых частиц fd или М13. Особый интерес представляют библиотеки антител человека, поскольку такие антитела могут быть использованы в терапии без ограничения.

Медленно, но неуклонно завоевывает признание в США и концепция использования бактериофагов для обеспечения безопасности пищевых продуктов. Все больше производителей пищевых продуктов признают преимущество использования бактериальных вирусов; о бактериофагах и их широком распространении в окружающей среде больше узнают и сами потребители.

С помощью фагов можно действительно безопасным и экологически чистым способом снизить количество патогенных бактерий (листерий, патогенных штаммов кишечной палочки, сальмонелл и др.) в пищевых продуктах без потери их питательной ценности и с сохранением нормальной, часто полезной микрофлоры. Для этого к продуктам добавляются (к примеру, распыляются по поверхности) соответствующие литические бактериофаги в нужной концентрации. Если бактерий-мишеней в продуктах не появится, то со временем фаги просто исчезнут.

Препараты на основе бактериофагов могут решить многие проблемы со здоровьем в качестве дополнения к бактериальным пробиотикам

За последние годы FDA уже одобрила несколько таких препаратов для обеспечения безопасности пищевых продуктов (Sulakvelidze, 2012; Woolston {amp}amp; Sulakvelidze, 2015). Первым официально признанным фагосодержащим препаратом для пищевых продуктов (в том числе готовых к применению) стал ListShield от компании Intralytix, Inc.

Кстати сказать, он является на сегодняшний день единственным препаратом на основе фага, одобренным FDA в качестве пищевой добавки. Препарат активен в отношении бактерии Listeria monocytogenes, вызывающей тяжелое заболевание, которое у людей со слабым иммунитетом может приводить к серьезным осложнениям и даже летальному исходу.

Еще нескольким фагосодержащим препаратам для пищевых продуктов присвоен статус GRAS (Generally Recognized As Safe – «в целом признаны безопасными»). Вероятно, что большинство, если не все, фагосодержащие препараты для обеспечения безопасности пищевых продуктов (а, возможно, и для «пробиотических» приложений) будут продаваться в США именно в этом статусе.

Большинство фаговых препаратов для обработки пищевых продуктов (в том числе ListShield) не содержат консервантов и не изменяют состав, вкус, аромат и цвет продуктов. Некоторые из них являются кошерными и халяльными и входят в список «органических материалов» международной некоммерческой организации National Review Institute, которая определяет условия, необходимые для качественного производства и переработки органической продукции.

Чтобы фаготерапия стала широко доступной во всем мире, безусловно, необходимо решить ряд технических и других проблем (Sulakvelidze {amp}amp; Kutter, 2005; Sulakvelidze, 2011). Однако, учитывая уже имеющийся потенциал бактериофагов для безопасного и эффективного лечения заболеваний, вызванных бактериями со множественной лекарственной устойчивостью, давно назрела необходимость приложить все усилия по внедрению этого природного антибактериального подхода в современную медицину.

Как действует бактериофаг?

На поверхности бактерии естьсигнальные белки (рецепторы). У разных бактерий и даже штаммов бактерий эти белки разные. Каждый фаг может заметить один-единственный тип сигнального белка. Значит, он способен поразить только определенный штамм бактерий.

Бактериофаг прикрепляется к бактериальной клетке с помощью посадочных ножек и подобно шприцу впрыскивает в нее ДНК из своей головки.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcopyrightru

С этого момента бактерия исчезает как личность.

Она перестает питаться, делиться, творить свои темные дела.

Она становится рабыней Изаурой фабрикой по производству маленьких симпатичных вирусят (юных бактериофагов) и с помощью своих ресурсов начинает синтезировать все необходимое для сборки новых вирусных частиц.

В конце концов, их становится так много, а ресурсов у бактерии так мало, что она разрывается, подобно новогодней хлопушке, и новорожденные фаги выходят на свободу на поиск новых жертв.

Если бактериофаг не находит свои сигнальные белки, он не будет нападать на бактерию. Он строго специфичен.

«Счетчики» бактерий

Бактериофаги служат не только разносторонним терапевтическим и «дезинфицирующим» средством, но и удобным и точным аналитическим инструментом микробиолога. К примеру, благодаря своей высокой специфичности они являются природными аналитическими реагентами для выявления бактерий определенного вида и штамма.

В простейшем варианте такого исследования в чашку Петри с питательной средой, засеянную бактериальной культурой, добавляют по капле различные диагностические бактериофаги. Если бактерия окажется чувствительной к фагу, то на этом месте бактериального «газона» образуется «бляшка» – прозрачный участок с убитыми и лизированными бактериальными клетками.

Анализируя размножение фагов в присутствии целевых бактерий, можно количественно определить численность последних. Так как количество фаговых частиц в растворе возрастет пропорционально числу содержавшихся в нем бактериальных клеток, то для оценки численности бактерий достаточно определить титр бактериофага.

Специфичность и чувствительность такой аналитической реакции достаточно высока, а сами процедуры просты в исполнении и не требуют сложного оборудования. Важно, что диагностические системы, основанные на бактериофагах, сигнализируют о наличии именно живого патогена, тогда как другие методы, такие как ПЦР и иммуно-аналитические, свидетельствуют лишь о наличии биополимеров, принадлежащих этой бактерии.

Сейчас для выявления и количественного определения разных штаммов микроорганизмов применяют специальные референсные виды фагов. Очень быстрые, работающие практически в режиме реального времени аналитические системы могут быть созданы на основе генетически модифицированных бактериофагов, которые при попадании в бактериальную клетку запускают в ней синтез репортерных флуоресцирующих (или способных к люминесценции) белков, таких как люцифераза.

При добавлении к подобной среде необходимых субстратов в ней будет появляться люминесцентный сигнал, величина которого соответствует содержанию бактерий в образце. Такие «меченные светом» фаги были разработаны для детекции опасных патогенов – возбудителей чумы, сибирской язвы, туберкулеза, а также инфекций растений.

Вероятно, с помощью модифицированных фагов удастся решить и давнюю задачу глобальной важности – разработать дешевые и быстрые методы детекции возбудителей туберкулеза на ранней стадии заболевания. Задача эта очень сложна, поскольку микобактерии, вызывающие туберкулез, отличаются крайне медленным ростом при культивировании в лабораторных условиях. Поэтому диагностика заболевания традиционными методами может затягиваться на срок до нескольких недель.

Фаговая технология позволяет упростить эту задачу. Суть ее в том, что к образцам анализируемой крови добавляют бактериофаг D29, способный поражать широкий спектр микобактерий. Затем бактериофаги отделяют, и образец перемешивают с быстрорастущей непатогенной культурой микобактерий, также чувствительной к этому бактериофагу.

Когда назначаются или могут назначаться бактериофаги?

1. При резистентности возбудителя ко всем антибиотикам.

2. При внутрибольничных инфекциях. Это инфекции, возникающие в условиях стационара. Микробы, вызывающие их, за время проживания в больничных покоях выработали устойчивость к большинству антибиотиков. Тысячи больных ежегодно умирают от заболеваний, которые по всем медицинским канонам прекрасно лечатся.

https://www.youtube.com/watch?v=upload

3. При наличии противопоказаний к большинству антибиотиков.

4. При аллергии на все антибиотики.

А также…

1. Беременным, кормящим, новорожденным.

2. При нетяжелых инфекциях, когда можно обойтись без антибиотика, но нельзя без антибактериальной терапии.

3. Пожилым людям с букетом хронических заболеваний.

4. Вместе с антибиотиком, чтобы уменьшить его дозу или повысить его эффективность, поскольку бактериофаг будет действовать и на бактерии, устойчивые к этому антибиотику.

«Промышленные» фаги

Методология фагового дисплея нашла себе и совершенно неожиданное применение. Ведь бактериофаги в первую очередь являются наноразмерными частицами определенной структуры, на поверхности которых располагаются белки, которые с помощью фагового дисплея можно «снабдить» свойствами специфически связываться с нужными молекулами.

https://www.youtube.com/watch?v=ytadvertiseru

Разработаны методы, позволяющие располагать нитчатые бактериофаги один за другим («хвост к хвосту»). Получающиеся в результате мультифаговые структуры представляют собой упорядоченные наноматрицы, которые могут быть использованы для создания транзисторных и диодных устройств

Так как вирус представляет собой достаточно жесткую конструкцию с определенным соотношением размерностей, это обстоятельство позволяет использовать его для получения пористых наноструктур с известной площадью поверхности и нужным распределением пор в структуре. Как известно, именно площадь поверхности катализатора является критическим параметром, определяющим его эффективность.

Исследователь из Массачусетского технологического института А. Бельхер использовала бактериофаг M13 как шаблон для роста наночастиц и нанопроводов родия и никеля на поверхности оксида церия. Полученные наночастицы катализатора способствуют конвертации этанола в водород, таким образом, этот катализатор может оказаться весьма полезным для модернизации существующих и создания новых водородных топливных ячеек.

Путем покрытия нитчатых фагов золотом и двуокисью индия были получены электрохромные материалы – пористые нанопленки, меняющие цвет при изменении электрического поля, способные реагировать на изменение электрического поля в полтора раза быстрее известных аналогов. Подобного рода материалы перспективны для создания энергосберегающих ультратонких экранных устройств (Nam et al., 2012).

В Массачусетском технологическом институте бактериофаги стали основой для производства очень мощных и чрезвычайно компактных электрических батарей. Для этого использовали живые, генетически модифицированные фаги М13, неопасные для человека и способные присоединять к поверхности ионы различных металлов.

В результате самосборки этих вирусов были получены структуры заданной конфигурации, которые при покрытии металлом сформировали достаточно длинные нанопровода, ставшие основой анода и катода. При самоформировании материала анода использовался вирус, способный присоединять золото и оксид кобальта, для катода – способный присоединять фосфат железа и серебро.

На основе комплексов бактериофага М13, двуокиси титана и одностенных углеродных нанотрубок были также созданы материалы для солнечных батарей (Dang et al., 2011).

Последние годы ознаменовались широкими исследованиями бактериофагов, которые находят себе все новые применения не только в терапии, но и в био- и нанотехнологиях. Их очевидным практическим результатом должно стать возникновение нового мощного направления персонализированной медицины, а также создание целого спектра технологий в пищевой промышленности, ветеринарии, сельском хозяйстве и в производстве современных материалов. Мы ждем, что второе столетие исследований бактериофагов принесет не меньше открытий, чем первое.

Литература

Бактериофаги: биология и применение / Ред.: Э. Каттер, А. Сулаквелидзе. М.: Научный мир. 2012.

Стент Г., Кэлиндар Р. Молекулярная генетика. М.: Мир. 1974. 614 с.

Тикунова Н. В., Морозова В. В. Фаговый дисплей на основе нитчатых бактериофагов: применение для отбора рекомбинантных антител // Аcta Naturae. 2009. № 3. C. 6—15.

Mc Grath S., van Sinderen D. Bacteriophage: Genetics and Molecular Biology. Horizon Scientific Press, 2007.

Примеры использования бактериофага при различных заболеваниях

Производственная база американской биотехнологической компании Intralytix, Inc. (Балтимор, США). Фото автора

Первое. Незнание, непонимание этой группы средств.

Второе. Чтобы назначить бактериофаг, нужно сделать посев на флору (кала, мочи, мазка из горла, носа и пр.) и чувствительность к бактериофагам, дабы подобрать оптимальный.

Во-первых, этот анализ недешевый, во-вторых, результаты будут готовы через 4-7 дней. В ряде ситуаций оставлять больного на это время без антибактериальной терапии нельзя.

Третье. Нет четких методических рекомендаций для использования бактериофагов при конкретных заболеваниях: куда, как и сколько? Поэтому назначения врачей часто носят эмпирический характер.

https://www.youtube.com/watch?v=ytpressru

Допустим, врач назначил капать Секстафаг в нос по 2 капли 3 раза в день. Результат его не устроил, и он увеличил дозу, к примеру, до 4 капель 3 раза в день. Но самое приятное в работе с фагами — это то, что навредить больному увеличением дозы сложно.

Четвертое. Лечение фагами, как правило, не входит в клинические рекомендации Минздрава по лечению различных заболеваний, потому что клинических исследований, доказавших эффективность бактериофагов, недостаточно. И потому что десятки лет привыкли пользоваться антибиотиками.

Пятое. Длительный курс лечения фагами: 1-2-3 недели, при необходимости больше.

Шестое. Проще выписать антибиотик, чем назначать посев, подбирать дозу фага, расписывать и объяснять, как его использовать.

Бактериофаги доказательная медицина

Седьмое. Курс лечения бактериофагом обходится в кругленькую сумму. Для многих это не по карману.

Как обычно назначают Секстафаг, или Пиобактериофаг поливалентный?

В нос, в ухо при гнойном отите, в глаза: по 2-3 капли 2-4 раза в день неразведенными. Предварительно согреть в руке!

А вот при бактериальном рините, когда сопли становятся «цветными» — он будет кстати.

В ухо второй способ: смачивают ватную турунду – и на час.

https://www.youtube.com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

Полоскание горла: по 10-20 мл на один раз. Бактериофаг набрали шприцем, подержали его в руке – согрели, вылили в стаканчик, чтобы удобнее было взять в рот. И так 2-3 раза в день. Разводить не надо.

Ингаляции через небулайзер, только не ультразвуковой: при ларингитах, бронхитах, пневмониях – по 5 мл в неразведенном виде 1 раз в день. Раствор стерильный, и при правильном использовании стерильность не нарушается.

При гайморите дополнительно врач промывает бактериофагом придаточную пазуху.

Внутрь: в зависимости от возраста по 5-30 мл 3 раза в день за час до еды (в инструкции есть таблица по возрастам). Для маленьких детей можно развести в воде, хотя на вкус бактериофаг не противный. Бывает, что ребенка от вкусного сиропа рвет, а бактериофаг он пьет прекрасно.

При кишечных инфекциях один пероральный прием врач может заменить введением препарата через «высокую» клизму с помощью газоотводной трубки или катетера: 10-50 мл на один раз в зависимости от возраста.

При циститах принимают внутрь. При хронических циститах бактериофаг может вводиться врачом непосредственно в мочевой пузырь.

При стоматитах, пародонтитах – 10-20 мл бактериофага взять в рот и полоскать. И так 3-4 раза в день.

При трофических язвах, пролежнях, гнойных ранах чаще используют Пиобактериофаг, Секстафаг или Стафилококковый бактериофаг– в случае чувствительности возбудителя. Смачивают марлевую салфетку раствором, накладывают на рану и фиксируют. Перевязки проводят ежедневно или 2 раза в день.

Интести-бактериофагприменяется для лечения различных кишечных инфекций: дизентерия, сальмонеллез, энтероколит, колит, или для коррекции нарушений кишечной микрофлоры. Хотя в последнем случае врач может назначить и Стафилококковый бактериофаг, и Пиобактериофаг, и Секстафаг – опять же в зависимости от возбудителя и его чувствительности к фагу.

Его применяют внутрь в возрастных дозировках (они указаны в инструкции) за 30 минут до еды или в виде клизмы (если у больного рвота на любое средство, принимаемое через рот).

Либо врач назначит 2 раза принимать его внутрь и 1 раз в виде «высокой» клизмы с помощью газоотводки или катетера.

Какие болезни лечат с помощью фагов?

  • Бактериальные инфекции ЛОР-органов: ангина, фарингит, ларингит, ринит, синусит.
  • Бактериальные инфекции органов дыхания: трахеит, бронхит, пневмония, плеврит.
  • Хирургические инфекции: нагноение ран, ожог, абсцесс, флегмона, трофическая язва, пролежни, фурункул, карбункул, панариций, парапроктит, мастит, остеомиелит и пр.
  • Инфекции мочеполовой системы: уретрит, цистит, пиелонефрит, вагинит (кольпит), эндометрит, аднексит и пр.
  • Кишечные инфекции.
  • Дисбиоз кишечника.
  • Инфекционные заболевания глаз (конъюнктивиты, гнойные язвы роговицы и пр.).
  • Гнойно-воспалительные заболевания новорожденных: омфалит (воспаление пупочной ранки), пиодермия (гнойнички по телу), конъюнктивит, сепсис и пр.

Что собой представляет препарат бактериофаг?

Это прозрачный раствор желтого цвета, который в зависимости от вида фага и заболевания назначают внутрь, ректально в виде клизм, местно в виде промываний, закапываний, примочек, полосканий, смоченных турунд, введения в плевральную, суставную полость, полость мочевого пузыря, матки, во влагалище.

При необходимости фаги используют в небулайзерах, только не ультразвуковых.

Среди бактериофагов есть особенно популярные. Это Стафилококковый бактериофаг, Пиобактериофаг, Секстафаг.

Секстафаг, к примеру, часто назначают при гайморите, длительных зеленых соплях, ларингите, тонзиллите, гнойном конъюнктивите, отсутствии стула у новорожденного, вздутии живота (если высеваются чувствительные к фагу микробы, например, стафилококк).

Как правильно использовать бактериофаг?

Фаги – ребята нежные. Любят температуру 2-8 градусов, поэтому должны храниться в холодильнике.

На сегодняшний день они выпускаются в виде раствора во флаконах по 100 мл и во флаконах объемом 20 мл по 4 штуки в упаковке.

Чтобы набрать из флакона необходимое количество фага, нужно вскрыть центральную часть колпачка. Под ним – резиновая пробка.

Обработать ее спиртом и ввести туда иглу одноразового шприца объемом 5-10 мл (объем шприца зависит от разовой дозы).

Набрать нужное количество фага, отсоединить шприц от иглы, подержать его в руке, чтобы согреть.

Далее поместить в чистую емкость и принять внутрь. Или взять нужное количество пипеткой. Или смочить фагом марлевую салфетку. Или взять в рот, чтобы прополоскать горло.

Игла в резиновой пробке остается, пока этот флакон не опустеет.

Для другого флакона берут другой шприц.

Флакон с воткнутой в него иглой хранят в холодильнике.

Впрочем, если бактериофаг назначен для приема внутрь и в клизме, можно не заморачиваться со шприцем, открыть его, взять нужно количество, закрыть резиновой пробкой и поместить в холодильник. Резиновую пробку не класть внутренней стороной на стол и не оставлять флакон открытым.

Перед открытием флакона его нужно встряхнуть и посмотреть, не помутнел ли раствор. Он должен быть прозрачным.

Прозрачный раствор можно использовать в течение всего срока годности.

Ответы на самые частые вопросы

Можно ли передозировать бактериофаг?

Случаи передозировки не описаны. В организме фаг направляется в очаг инфекции, где есть его жертва. Он размножается до тех пор, пока есть ЕГО бактерии. После этого он выводится из организма естественным путем.

Развивается ли устойчивость к фагам?

Как утверждают специалисты НПО «Микроген», устойчивость к ним не развивается. Прежде всего потому, что они сами постоянно эволюционируют. Но в интернете можно найти публикации, где это утверждение оспаривается.

Как часто можно принимать Бактериофаги?

Так часто, как это требуется.

Можно ли принимать фаг совместно с другими препаратами?

Бактериофаги совместимы с любыми препаратами.

Бывают ли побочные эффекты от фагов?

В пищевых продуктах могут содержаться бактерии, вызывающие кишечные инфекции. Чтобы снизить вероятность заражения, их можно обрабатывать фаговыми препаратами, прицельно убивающими только патогены

Крайне редко. В составе бактериофага есть консервант, может быть индивидуальная непереносимость его.

Можно ли использовать Бактериофаг без анализа на чувствительность к нему возбудителя?

Можно, если денег не жалко. Этот возбудитель может быть нечувствителен к фагу. Каждая бактерия имеет несколько штаммов (разновидностей), один штамм может быть чувствителен к фагу, а другой нет.

Можно ли рекомендовать бактериофаги покупателям?

Теоретически поливалентные фаги (Секстафаг, Пиобактериофаг) рекомендовать можно, тем более, что эти средства — безрецептурные. Но практически фаг может оказаться неэффективным, если возбудитель к нему нечувствителен.

Бактериофаги атакуют бактерию

К кому придут с претензиями?

Правильно! К Вам.

Так что, пусть лучше ответственность за назначение фага берет на себя врач.

Почему фаг может оказаться неэффективным?

1. Не сделан анализ на флору и чувствительность к бактериофагу.

2. Неадекватная дозировка. Или врач выбрал не лучший в данной конкретной ситуации способ введения бактериофага.

3. Не долечились. Средний курс лечения фагом: 7-14 дней. При необходимости врач может его продлить.

4. Были нарушены условия хранения и использования.

скрин

5. Некоторые микроорганизмы способны образовывать в органах биопленки. Это конгломераты бактерий, куда не могут проникнуть ни фаги, ни антибиотики.

Как правильно перевозить фаги?

Производитель пишет, что допускается транспортировка при температуре от 9 до 25 градусов не более 1 месяца.

Что такое Отофаг, Фагодент, Фагодерм, Фагогин?

Это косметические гели с бактериофагами для гигиены и нормализации микрофлоры уха, полости рта, интимной сферы, кожи и мягких тканей. Их производит не НПО «Микроген», а другая компания.

Что лучше: использовать фаг вместе с антибиотиком или отдельно?

В каждой конкретной ситуации это решает врач. Мое мнение: если их использовать вместе, все равно это не убережет от негативных последствий применения антибиотика. Поэтому если можно обойтись без антибиотика, лучше использовать один бактериофаг.

Советы по продаже бактериофага

:)

1. Посчитайте вместе с покупателем количество упаковок бактериофага на курс.

2. Для начала отпустите количество упаковок на 1-2 дня, чтобы посмотреть индивидуальную переносимость. Скажите покупателю, чтобы в случае хорошей переносимости он пришел за остальными упаковками, иначе деньги окажутся потраченными зря, и лечение будет неэффективным.

3. Не забудьте предложить разовые шприцы на 5 или 10 мл для забора из флакона нужного количества фага и спирт (салициловый, левомицетиновый, борный) – чтобы протирать резиновую пробку флакона.

4. Предупредите, чтобы хранили бактериофаг в холодильнике.

5. Перед применением, особенно, в виде капель или полоскания, шприц с набранным фагом нужно подержать несколько минут в руке.

6. Скажите, что при помутнении раствора, появлении каких-то включений его использовать нельзя.

На этом у меня все. Надеюсь, что статья была для вас полезной.

Напоминаю, что у нас вконтакте есть группа. Она предназначена ТОЛЬКО для сотрудников аптек. Если Вы — сотрудник аптеки, присоединяйтесь!

строение бактериофага

Все мои книги для сотрудников аптек собраны здесь.

https://www.youtube.com/watch?v=ytdevru

До новой встречи на блоге «Аптека для Человека»!

С любовью к вам, Марина Кузнецова

Рейтинг
( Пока оценок нет )
Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
onivnas.ru